探索大腦的秘密：原代皮層和海馬神經元培養實驗全解析
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原代皮層和海馬神經元培養 神經科學作為***個重要的學科，研究神經元的功能和結構對于了解人類大腦的工作機制以及治療神經退行性疾病具有重要意義。 原代皮層和海馬神經元培養實驗是神經科學研究中的***種常見實驗方法，通過培養神經元，我們可以研究它們在不同生理和病理狀態下的行為和功能。本次我們將詳細介紹原代皮層和海馬神經元培養的實驗全流程，從神經元的獲取、培養、觀察等各個環節，為神經科學研究者提供實用的實驗指導和參考。
01 培養前準備： ? 高壓滅菌：器械包，槍頭盒（1mL，200ul，10ul），紗布，超純水。提前高壓滅菌，滅菌后的物品盡量在 1 周內使用。 ? 細胞板包被：用 0.1mg/mL 多聚賴氨酸(貨號：sigma：P1024)提前 1-2 天包被細胞板,次日用超純水清洗細胞板 3 次，培養箱中烘干備用。 ? 細胞培養基配備： 含FBS 的DMEM： DMEM 40mL+F-12 5mL+FBS 5mL+雙抗 500ul Neurobasal：Neurobasal 48.5mL+B27 1mL+谷氨酰胺 250ul（0.5mM） 02 動物：購買孕鼠（孕 16-18 天）或 1-3 天新生鼠。 03 紫外消毒工作臺，之前高壓滅菌的器械包，槍頭盒，紗布，超純水等。工作臺和細胞間的紫外同時開啟 30 min 后，通風 10 min。 04 取胎鼠：酒精消毒工作臺，氣體麻醉孕鼠，以“Y”字形剪開孕鼠下腹部， 取出完整子宮，避免子宮破裂。將完整的子宮放入***個干凈的器皿（10 cm 細胞皿），酒精消毒器皿外部后，轉移至細胞房。 05 取胎鼠腦：將所有的胎鼠腦全部取出，放入***個裝滿 DMEM 的 10 cm 皿內，10 cm 皿放在 1 個冰盒上（新生鼠則泡酒精后直接取腦）。 06 顯微鏡下分離提取腦海馬或皮層組織：取***個胎鼠腦至 35mm 的小皿中，皿內裝有 DMEM，將胎鼠腦放置為背側面朝上，用鑷子沿中線分開左右兩側， 用鑷子固定住胎鼠腦，用另外 1 個鑷子將皮質向外側撥開，暴露出海馬，剝離血管膜（盡量剝干凈可有效減少成纖維細胞干擾），分離出海馬段。將分離出的海馬段放置于***個 35mm 小皿內，小皿裝有 DMEM，小皿放在冰盒上。 07 胰酶消化海馬組織。將裝有全部海馬組織的小皿轉移至超凈工作臺操作，放在***個冰盒上操作，將小皿側放，用 1mL 槍吸干凈皿內 DMEM，然后用眼科剪將海馬剪碎，約剪成 1mm3 的肉糜狀，加入適量的胰酶（***般 1 只孕鼠取出的胎鼠海馬，用 2mL 胰酶），適當將海馬組織碎搖勻散開，盡快放入至 37°培養箱，消化 15min。若組織較多，適當加長消化時間。 08 終止消化。將小皿取回至工作臺的冰盒上，加入 2mL DMEM 終止消化，將皿內所有液體轉移至***個 15mL 離心管。 09 離心。用 1mL 槍吹打混勻海馬組織懸液，1500rpm，離心 3min，需要用另外***個 15 mL 離心管裝 4mL 廢液進行配平。 10 制備細胞懸液：將離心后的離心管取出，棄去上清液，留沉淀，加入 1mL DMEM，用 1mL 槍頭吹打均勻，約吹打 10-15 次，靜置 1min 后，取上清液至***個新的 15mL 離心管，這***步重復 2 遍，將獲得 3-4mL 細胞懸液。 11 種板：用含 FBS 的 DMEM 制備合適的種板細胞懸液，種板。6 孔板種板密度為 7.5 X105 個/mL，12 孔板種板密度為 4X105 個/mL。放入 37℃培養箱培養。 12 4-6 h 后換液，將含 FBS 的 DMEM 全部換為 Neurobasal。 13 細胞換液。***般 2 天換液***次，建議第 2 天進行阿糖胞苷處理。24h 后用Neurobasal 全量換液，第 7-8 天進行 OGD 或其他后續處理。 14 可用 MAP2 進行神經元的純度驗證，如下圖： 腦組織解離不止有手工酶解方法，【RWD單細胞懸液制備儀】全自動解離神經組織助力用戶神經研究。可以將大小鼠腦組織溫和、快速、高效地制備成單細胞懸液，同時保留細胞重要的表面抗原表位。獲得的單細胞懸液可繼續用于原代細胞培養或細胞分選等下游實驗應用。
(文章來源于儀器網)
