T細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境，使T細胞能夠生存、生長和繁殖的***種技術(shù)。在T細胞培養(yǎng)中，細胞被置于無菌、適宜溫度、酸堿度和***定營養(yǎng)條件的環(huán)境中，以保持其活力和功能。T細胞培養(yǎng)被廣泛應用于免疫學、生物醫(yī)學和藥物研發(fā)等領(lǐng)域，是研究T細胞功能、探索免疫反應機制的重要手段。通過T細胞培養(yǎng)，科學***可以觀察和分析T細胞的增殖、分化、凋亡以及細胞因子分泌等過程，了解其在免疫應答中的作用。同時，T細胞培養(yǎng)也為疾病治-療和預防提供了新的思路和手段，如免疫療法、疫苗研發(fā)和細胞治-療等。

T細胞培養(yǎng)的原理是通過復合抗體孵育標記脾-臟細胞中除T細胞以外的其他細胞，再用磁珠結(jié)合抗體，然后用磁極吸附磁珠，那剩下的就是沒有結(jié)合磁珠的T細胞了。

t細胞培養(yǎng)方法包括以下步驟：

①抗體包被培養(yǎng)板：用無菌PBS制備5~10 μg/mL的CD3抗體，然后在96孔板的條件孔中，每孔加入50 μL抗體溶液。

②接種細胞：在抗體包被的培養(yǎng)板中接種T細胞，然后將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中2小時或者提前***天準備培養(yǎng)板，置于4℃過夜。

③洗滌和消化：在接種細胞之前，用移液槍將培養(yǎng)孔中的50 μL抗體吸出，然后用200 μL PBS洗滌培養(yǎng)孔并棄去PBS。重復此步驟以去除所有未交聯(lián)的抗體。

④細胞消化：將細胞培養(yǎng)瓶豎立放置，吸走培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中的脫落細胞較多，說明細胞現(xiàn)在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA（0.02%），來回輕微晃動培養(yǎng)瓶直到細胞完全脫落，加入10mlMEM，混勻，不能吹打，分裝2瓶。如果細胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養(yǎng)瓶中的細胞貼壁較牢固，培養(yǎng)基上清沒有細胞脫落碎片，且細胞長滿達到80％以上，吸走培養(yǎng)基，加入5ml的PBS+EDTA（0.02%），迅速輕微晃動，豎立培養(yǎng)瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過3min，細胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻，分裝2瓶。

⑤培養(yǎng)：將分裝的T細胞接種到新培養(yǎng)瓶中，通常T25加10~12ml培養(yǎng)基培養(yǎng)，2~3天左右換液***次，若培養(yǎng)基變黃及時換液，以維持***個相對穩(wěn)定的培養(yǎng)條件，有利于細胞活正常生長。

不管是我們實驗室中常規(guī)的細胞培養(yǎng)，還是臨床上的CAR-T細胞治-療等，提高T細胞的增殖和持久性，以及增強細胞再免疫抑-制性TME中的功能，都離不開細胞因子。

細胞因子是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的***類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質(zhì)。具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。

細胞因子可被分為白細胞介素(IL)、干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趨化因子、生長因子(GF)等。

細胞因子γ鏈共受體***族包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21，它們在T細胞分化、增殖和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中起著關(guān)鍵作用。他們受體包括共同的γ鏈（γc）和***個各自單獨的受體鏈，下游信號激活STAT信號通路。

(文章來源于儀器網(wǎng))