分析檢測的細胞

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細胞接種或做其他實驗之前的細胞換洗和濃縮過程中，離心和重懸是常用的方法。***般認為CHO細胞是比較好生長的，但有時它們也會有特別的生長要求，需要專門的培養(yǎng)基才能很好地生長。譬如，以下實驗中的CHO細胞通過1000g離心5min后（相對溫和的離心），在培養(yǎng)基或PBS緩沖液中重懸，然后評估不同細胞制備條件對細胞計數(shù)和活率分析結果的影響。

結果顯示：在推薦的培養(yǎng)基中離心和重懸對這種CHO細胞沒有明顯的影響。但是在PBS緩沖液中重懸對這種CHO細胞活率的影響很大，和平均細胞直徑***樣都明顯變小。同時，細胞濃度也有***些降低，可能是在重懸過程中對細胞造成了損傷。在PBS中的第二次離心和重懸對該細胞活率和直徑繼續(xù)產(chǎn)生負面的影響。

EL4細胞通常被認為是易碎的，而且即使在理想條件下生長也比較緩慢，并且活率***般<70%。我們制備了EL4細胞后分裝到96孔板中。細胞類型使用哺乳動物細胞參數(shù)，只是混合次數(shù)有所差異。目的是評估增加混合后細胞受到混懸和離心破壞的影響有多大。

根據(jù)EL4細胞的測試結果（如上表所示）可以看到：總細胞計數(shù)，總細胞濃度和直徑都沒有怎么變化，而活細胞數(shù)隨混合次數(shù)增加逐漸下降，因而細胞活率也相應下降。這表明對于這類細胞，減少吹打混懸和臺盼藍混合次數(shù)可能會更適合，過多的混勻吹打需要避免。

3.1 SF昆蟲細胞

即使在理想條件下SF9細胞生長要達到高密度也不容易，通常活率都在60%以下。因此96孔板測試導致儀器檢測總時間延長，可能會對排在后面的待測細胞產(chǎn)生負面影響。我們使用了標準昆蟲細胞的參數(shù)在96孔板上對SF9昆蟲細胞進行了評估。

結果顯示在測試的3小時過程中，細胞活率沒有檢測到有大的影響，細胞直徑也沒有太大變化，但如果細胞死亡或膨脹，這兩個參數(shù)是會改變的。雖然活率較低，但在離開細胞培養(yǎng)環(huán)境后比較長時間內(nèi)并沒有不利影響，所以這些細胞足夠強壯。

3.2 HELA細胞

讓HELA細胞生長成高度融合狀態(tài)產(chǎn)生脅迫效應，然后對細胞收集并重懸分散。再將細胞分裝到96孔板中，通過標準哺乳動物細胞類型測試得到分析結果。96孔板按每列的順序依次檢測，從而保證每行之間細胞檢測間隔時間是***致的。

注意到96孔板后面的樣品得到稍微更高的濃度。同時更多的研究發(fā)現(xiàn)，隨著時間的增加細胞的平均直徑會逐漸變大。

通過觀察得到的細胞圖像發(fā)現(xiàn)，細胞數(shù)量的增加看上去是膨脹或氣泡，同時還伴有許多非細胞顆粒。雖然通過細胞分析參數(shù)設置，后者（非細胞顆粒）通常不會對細胞計數(shù)產(chǎn)生影響，但它們可能被計數(shù)為小細胞。膨脹效應導致在3小時的檢測時間中（96孔板）平均細胞直徑增加大概10%，而且可能導致低于***小直徑閾值的小細胞也被統(tǒng)計到計數(shù)結果中。